Preparación de la muestra:
Recolección de muestras: recolecte muestras como sangre, tejido, saliva y orina de acuerdo con el propósito del experimento.
Extracción de ADN: use un kit de extracción de ADN dedicado para extraer ADN de la muestra.
Preparación de reacción de PCR:
Cebadores de diseño: diseñe pares de cebadores específicos basados en la secuencia objetivo para la amplificación del ADN de la plantilla.
Prepare la mezcla de reacción: incluyendo ADN de plantilla, cebadores, tampón, ADN polimerasa, dntps (trifosfatos de desoxinucleósidos), mg 2+, etc.
Establecer el programa PCR:
Configuración del instrumento de PCR: ingrese los parámetros del ciclo de PCR preestablecido, como la temperatura de precalentamiento de 95 grados, la temperatura de desnaturalización (como 95 grados), la temperatura de recocido (como 55 grados), la temperatura de extensión (como 72 grados) y el número de ciclos.
Reacción de PCR:
Agregue la muestra: agregue la mezcla de reacción al tanque de reacción de PCR o el chip, y cada muestra generalmente tiene una reacción bien.
Realice PCR: el instrumento de PCR ciclos de acuerdo con el programa preestablecido, que incluye calefacción, enfriamiento, recocido y pasos de extensión.
Análisis de productos:
Enfriamiento después de la amplificación: después de que se complete la PCR, la muestra se enfría brevemente a 4 grados.
Separación electroforética: use la tecnología de electroforesis en gel, como la electroforesis en gel de agarosa, para separar productos de PCR de diferentes longitudes.
Escaneo de fluorescencia: los cebadores etiquetados con fluorescencia emiten la luz de una longitud de onda específica en el producto amplificado, y el instrumento PCR lee estas señales y las registra.
Procesamiento de datos e interpretación:
Software de análisis de datos: use un software especializado para analizar la señal fluorescente y calcular la concentración o concentración relativa del fragmento objetivo.
Interpretación de resultados: según la curva de PCR y la línea de base, determine si la PCR es exitosa, si el fragmento objetivo existe y cuánto es.
Grabación y conservación de resultados:
Registre los resultados en el informe experimental y preserve adecuadamente los datos y muestras originales.